Prof.Dr.Luis Carlos Figueira de Carvalho

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COLORAÇÃO SIMPLES

COLORAÇÃO SIMPLES

Objetivos: Observar microrganismos em preparações coradas a fim de visualizar melhor algumas estruturas celulares, bem como forma e disposição.

Princípio:  A coloração simples tem bases físico-químicas. A impregnação de uma célula por um corante pode ser entendida a partir de fenômenos como a capilaridade, osmose, adsorsão e absorção. Mas, é, sobretudo pela compreensão de certas reações de corantes de organóides, inclusões e estruturas celulares que se firmam as bases desta metodologia. Desta forma é observada uma reação estequiométrica entre corantes e uma dada estrutura, por força da afinidade de suas cargas opostas. Normalmente o que é uma reação de dupla troca de cátions e anions, do tipo[1]:

(Microrganismos)- (Na+, K+, etc) + (cromóforos) ® (microrganismo)- (cromóforos) +  + (Na+ K+, etc. ) + (Cl-, oxalato, etc).

Material: Material biológico[2] em suspensão, lâminas, lamínulas, microscópio, pipeta Pasteur (ou conta-gotas), corante (azul de metileno, verde malaquita, Giemsa, etc)

Método: Fazer um esfregaço com o material biológico. Esperar secar. Fixar ao calor[3]. Cobrir o esfregaço com o corante. Esperar por 1 a 5 min. Lavar com água, secar o observar ao microscópico com objetiva de imersão.

Resultados:  Anotar as suas observações, tais como presença de células, afinidade pelo corante, forma e disposição dos microrganismos, etc.

Comentários:

Sob o ponto de vista químico, os corantes são substâncias orgânicas possuidoras de grupamentos cromóforos que podem conferir aos corpos celulares uma dada pigmentação. Os corantes são classificados em três grupos, de acordo com a carga do íon da porção corante da molécula. Assim, são corantes ácidos os que têm uma carga negativa; básicos os que têm cargas positivas e neutros os que são, portanto, eletricamente neutro.

                Em bacteriologia, os corantes básicos são os mais empregados. Isto se justifica pela presença de cargas elétricas, negativas, ao longo do corpo celular, o que demonstra a afinidade por este tipo de corantes.

 Questões:

  1. Os meios de cultivo e a idade da colônia exercem alguma influência na morfologia de células em coloração simples?
  2. A coloração simples se presta a identificação de uma cultura mista de microrganismos? Que observações poderiam ser obtidas?
  3. Qual a aplicação da coloração simples no Diagnóstico Laboratorial de doenças infecciosas?
  4. Cite exemplos de Doenças Infecciosas e seu agente infecioso que são diagnosticados seguramente pela uma coloração simples?
  5. Cite alguns cuidados, a serem tomados para a execução satisfatória da coloração simples.


[1] Equação válida para corantes básicos

[2] Saliva, Secreção nasal, Secreção do ouvido, suspensão de bactéria ou leveduras, etc

[3] Passar suavemente a lâmina três vezes sobre a chama do bico de Bunsen

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